保健食品中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定

　　1.范围

　　本方法规定了保健食品中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定方法。

　　本方法适用于保健食品（糖浆、糖粉、饮料、奶粉）中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定。

　　本方法最低检出量：异麦芽糖2µg； 潘糖5µg；异麦芽三糖10µg；蔗果三糖(GF2)5µg ；蔗果四糖(GF3)5µg ；蔗果五糖(GF5)10µg ；棉籽糖20µg；水苏糖30µg。

　　2.原理

　　试样除去蛋白后，离心、脱色，用液相色谱分析，用NH2柱分离，示差检测器测定，外标法定量。

　　3.试剂

　　除特殊说明，所用试剂均为分析纯。实验用水为去离子水或同等纯度的蒸馏水。

　　3.1 乙腈（色谱纯）。

　　3.2 无水乙醇。

　　3.3 麦芽糖、异麦芽糖、潘糖、麦芽三糖、异麦芽三糖、棉籽糖、水苏糖(含量≥98%) ，

　　3.4  低聚果糖（总含量³96%，其中GF238 %, GF3 51%, GF4 7%）。

　　3.5 麦芽糖、异麦芽糖混合标准溶液: 分别称取麦芽糖10.0mg, 异麦芽糖15.0mg, 潘糖9.0mg, 麦芽三糖15.0mg, 异麦芽三糖12.0mg，用水溶解，并定容至1.0mL。将此溶液逐级稀释成下列浓度：

　　标准溶液名称：麦芽糖、异麦芽糖、潘糖、麦芽三糖、异麦芽三糖（mg/mL）

　　1          0.50    0.75    0.45      0.75       0.60

　　2          1.00     1.50    0.90      1.50       1.20

　　3          2.00     3.00    1.80      3.00       2.40

　　4         10.00    15.00    9.00     15.00      12.00

　　3.6 低聚果糖标准溶液：精密称取含 GF238%、GF3 51%、GF4 7%的低聚果糖标准品0.0500g,用水溶解并定容至2.50mL。将此液逐级稀释成下列浓度：

　　标准溶液名称： GF2、    GF3、   GF4   （mg/mL）

　　1          1.50     2.00     0.30

　　2          3.00     4.00     0.60

　　3          4.50     6.00     0.90

　　4          6.00     8.00     1.20

　　5          7.50    10.00     1.40

　　3.7 棉籽糖、水苏糖标准溶液：精密称取棉籽糖0.0400g，水苏糖0.0600g，用水溶解并定容至4.0mL。将此液逐级稀释成下列浓度：

　　标准溶液名称：         棉籽糖     水苏糖    （mg/mL）

　　1                  2.0         3.0

　　2                  4.0         6.0

　　3                  6.0         9.0

　　4                  8.0        12.0

　　5                 10.0        15.0

　　由于试样中程度不同的含有葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖，所以在配制标准应用液时可加入适量的葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖，主要是用于定性。

　　将各标准系列注入高效液相色谱仪进行测定，绘制标准工作曲线。

　　4.仪器

　　4.1 高效液相色谱仪（附带示差检测器）。

　　4.2 离心机： 10 000 r/min 。

　　4.3 分析天平：1/10 000。

　　4.4 分析天平：1/1 000。

　　5.分析步骤

　　5.1 试样制备

　　5.1.1 糖浆和糖粉：称取1.0000g 糖浆或0.2000g糖粉，用水稀释或溶解，并定容置10.0mL，摇匀，溶液过0.45mm滤膜，滤液用于HPLC测定。

　　5.1.2 不含乳液体饮料：饮料直接离心，上清液过0.45mm滤膜, 滤液用于HPLC测定。

　　5.1.3 含乳液体饮料: 取10.0mL试样放入烧杯中，加无水乙醇30mL，搅拌混匀，放置5min，离心，取上清液20 mL在沸水浴上挥发近干。残液用水溶解并定容至5-10 mL，溶液过0.45mm滤膜，滤液用于HPLC测定。

　　5.1.4 奶粉：称取 2.000g试样，放入200mL烧杯中，加水15.0mL溶解，再加45.0mL无水乙醇，搅匀，放置5min，离心，取上清液30.0mL在沸水浴上挥发近干，残液用水溶解并定容至一定体积，溶液过0.45mm滤膜，滤液用于HPLC测定。

　　5.2 高效液相色谱参考条件

　　5.1.1 色谱柱: 不锈钢柱，内径4.6mm×300mm反相氨基柱,粒径 5mm ;

　　5.1.2 柱温 45℃，检测室40℃。

　　5.1.3 流动相：乙腈+水=76+24

　　5.1.4 流量：1.5 mL/min。

　　5.1.5 灵敏度： 64。

　　5.1.6 进样量：20 mL

　　5.1.7 在上述色谱条件下注入标准溶液和试样溶液，以保留时间定性，外标法定量。

　　5.1.8

　　6.分析结果的表述

　　6.1 计算

　　A×Ci×V

　　X= ------------------

　　Ai ×m ×1 / 2

　　式中： X：试样中某低聚糖的含量, g/kg ( g/L)。

　　A：试样的峰面积或峰高。

　　Ci ：单一低聚糖标准溶液的浓度, mg/mL 。

　　Ai ：标准溶液的峰面积或峰高 。

　　ｍ： 试样质量, g（mL） 。

　　V：试样定容体积，mL。

　　6.2 结果表示：结果保留两位有效数字。

　　注：功能性异麦芽低聚糖的含量以异麦芽糖、潘糖、异麦芽三糖计。

　　7.允许差

　　同一实验室，平行测定两次结果的相对偏差不得超过10%。

　　8.准确度

　　准确度以回收率表示。

　　将某种低聚糖加入糖浆、饮料或奶粉中，做回收率实验，回收率应在90%~104%范围内。

　　9.正相氨基色谱柱转换为反相氨基色谱柱的步骤以产品说明书为准。